实验技术服务

TECHNICAL SERVICE

油红O染色

一、组织冰冻切片实验步骤

1、取材:将动物处死后,低温环境下取出新鲜组织放入-80℃冰箱冷冻备用。

2、包埋:将冷冻的组织根据需要切成小块放于冰托上,用OTC包埋剂将组织完全覆盖,放入冰冻切片内冷冻。

3、切片:将冷冻好的组织以及冰托固定在冰冻切片机上,按照需求调整好厚度进行切片,一般切4-8μm。

4、固定:将切好的组织片用载玻片贴起,放入甲醛固定中固定30s-1min。固定后冷冻起备用。

二、油红O染色实验步骤

1、 切片复温:将切片取出,室温复温,复温后经蒸馏水洗三次,每次5min。

2、 染液配置:将油红O母液与蒸馏水按3:2比例混合,混合后静置10min,过滤后为工作液。

3、 浸洗:切片经蒸馏水洗后,入60%异丙醇浸洗。

4、 染色:将工作液滴加到组织上染色10min。

5、 分化:将切片入60%异丙醇分色,镜下控制时间,蒸馏水洗。

6、苏木素染细胞核:切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗。

7、封片镜检:将切片上的水分甩干,用甘油明胶封片。封片后尽快镜检并拍照。