实验技术服务

TECHNICAL SERVICE

免疫荧光实验步骤

1. 石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h,脱蜡至水,用PBS洗三次,每次5 min。

2. 切片置于EDTA缓冲液中微波修复,中火至沸后断电,间隔10min低火至沸。

3. 自然冷却后PBS洗3次,每次5 min。

4. 切片置于3%过氧化氢溶液中,室温下避光孵育10 min。

5. PBS洗3次,每次5 min,甩干后5% BSA封闭20 min。

6. 去除BSA液,每张切片加入约50μl稀释的一抗(见附录1)覆盖组织,4℃过夜。

7. PBS洗3次,每次5 min。

8. 去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗(见附录2),37℃孵育50min。

9. PBS洗3次,每次5min。

10.去除PBS液,每张切片加50-100μlDAPI染液,室温避光孵育5min。

11.染色后将切片放入PBS中洗3次,每次5min。

滴加适量的抗荧光淬灭剂于组织上,盖玻片封片,荧光显微镜下观察。